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AIM: To observe the neuritogenic actions of botulinum neurotoxin serotype A heavy chain (BoNT/A HC) on cultured Neuro-2a cells and to investigate the related signaling mechanisms for the effect of BoNT/A HC. METHODS: Neuro-2a cells were treated with different doses of BoNT/A HC (0.01, 0.1, 1 and 10 nmol/L), and then the cells were harvested at 24 h, 48 h and 72 h of BoNT/A HC exposure for detecting the neurite length and the percen-tage of the cells with neuronal processes by immunofluorescence staining. The most efficient dose of BoNT/A HC was chosen for exposure to Neuro-2a cells as the above. Whole cell protein was harvested at different time points for detecting the protein levels of phosphorylated ERK1/2 (p-ERK1/2) and phosphorylated Akt (p-Akt) by Western blot. RESULTS: Low doses of BoNT/A HC stimulated the neurite outgrowth, and increased the percentage of the cells with neurites compared with the negative controls (P<0.05), especially in the group with 1 nmol/L of BoNT/A HC treatment. Meanwhile, the phosphorylation of ERK1/2 and Akt was increased after treated with BoNT/A HC. There was an increasing tendency for the phosphorylation of ERK1/2 after the exposure of the cells to BoNT/A HC. The obvious increase in p-ERK1/2 was seen from 60 min to 5 h with 1 nmol/L of BoNT/A HC treatment (P< 0.05), and the increased protein level of p-Akt was mainly observed at 15 min and 60 min (P<0.05). CONCLUSION: BoNT/A HC stimulates the neuritogenesis. The neuritogenic mechanism of BoNT/A HC on Neuro-2a cells might be realized by activation of the phosphorylation of ERK1/2 and Akt. 相似文献
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为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠.将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb效价为1:160 000~1:640 000.亚型鉴定结果表明,这些MAb分属2个亚型(1F1、3E1,IgG2a;3F5、4F9,IgGl),轻链均为K链.Western blot分析显示,MAb1F1、3F5、4F9能特异性地识别SVCV的N蛋白(47 ku),3E1能特异性地识别SVCV的G蛋白(69 ku).采用相加ELISA法对抗原表位分析结果显示,1F1、3F5、4F9可能识别相同的表位,3E1则识别不同的表位.间接免疫荧光试验结果显示4株MAb均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色.这些MAb的制备为SVCV免疫学检测方法的建立奠定了基础. 相似文献
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以引种栽培的樱桃砧木'大青叶'茎段为试材,探讨基本培养基和植物生长调节剂对茎段腋芽萌发、生长与增殖的效应,筛选离体培养的最适培养基.结果表明:MS+6-BA0.5 mg/L+ZT 0.1 mg/L+蔗糖20g/L+琼脂0.6 mg/L、MS+6-BA 1.0 mg/L+ZT 0.1 g/L+蔗糖20 g/L为丛生芽诱导及分化增殖的最适培养基;1/2MS+IBA 0.7mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂0.6 mg/L为生根诱导的最佳培养基配方. 相似文献
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